BIS-TRIS Buffer CAS 6976-37-0

זהו מאגר ביולוגי יעיל עם טווח חציצה יעיל של pH של 5.8-7.2 וערך pKa של 6.5 (25 מעלות). בניסויים ביוכימיים, ביומולקולות רבות כגון חלבונים וחומצות גרעין רגישות מאוד לערכי pH, ואפילו שינויים קטנים ב-pH יכולים להשפיע על המבנה והתפקוד שלהן. BIS-TRIS יכול לייצב את ערך ה-pH של התמיסה בטווח pH זה, ולספק סביבה יציבה לתגובות ביוכימיות. בתהליך של הפרדת חלבון וטיהור, ניתן לשמור על המבנה הטבעי של החלבון כדי למנוע דנטורציה או משקעים עקב שינויים ב-pH.

לדוגמה, בטכניקות טיהור חלבונים כמו כרומטוגרפיה של חילופי יונים וכרומטוגרפיה זיקה, השימוש במאגר BIS-TRISיכול להבטיח שהאינטראקציה בין חלבונים ואמצעי כרומטוגרפיה מתרחשת בתנאי pH יציבים, ובכך לשפר את יעילות הטיהור והטוהר.

במבחני פעילות האנזים, פעילות האנזים תלויה לעתים קרובות בסביבת pH ספציפית. ניתן לשלוט במדויק על ערך ה-pH של מערכת התגובה כדי לאפשר לאנזים להפעיל פעילות קטליטית בתנאי pH אופטימליים, ובכך למדוד במדויק את פעילות האנזים. יש לכך משמעות רבה לחקר התכונות, מנגנוני הפעולה ופיתוח תכשירי אנזימים של אנזימים.

ל-BIS-TRIS יש את היכולת לתאם עם יוני מתכת שונים וליצור קומפלקסים יציבים, כגון Zn ² ⁺ - BIS-TRIS, Mn ² ⁺ - BIS-TRIS, וכו'. קומפלקסים אלו של יוני מתכת ממלאים תפקיד חשוב בחקר המבנה והמולקולות הביולוגיות של המתכת. יונים פועלים לעתים קרובות כקופקטורים להשתתף ביצירת מרכזים פעילים בחלבונים. על ידי תיאום BIS-TRIS עם יוני מתכת, ניתן לייצב את המבנה של קומפלקסים של יוני מתכת חלבוניים, מה שמקל על השימוש בטכניקות כגון -קריסטלוגרפיה של קרני X ותהודה מגנטית גרעינית (NMR) לניתוח מבני.

לדוגמה, המרכזים הפעילים של אנזימים מסוימים המכילים אבץ דורשים יוני אבץ כדי לשמור על הפעילות הקטליטית שלהם, ומתחמי BIS-TRIS Zn ² ⁺ יכולים לספק סביבה מבנית יציבה לאנזימים אלה, מה שעוזר לנתח במדויק את המבנים התלת--ממדיים שלהם.

במחקר חומצות גרעין כגון רצף DNA, יוני מתכת עשויים להיות מעורבים גם בקיפול ובוויסות תפקודי של חומצות גרעין. התיאום בין BIS-TRIS ויוני מתכת יכול לווסת את הסביבה המקומית של חומצות גרעין, להשפיע על האינטראקציות בין חומצות גרעין לחלבונים, מולקולות קטנות וכו', מה שמספק כלי רב עוצמה למחקר מעמיק על המבנה והתפקוד של חומצות גרעין.

ל-BIS-ל-TRIS יש יישומים חשובים בניסויים באלקטרופורזה של חלבונים. SDS-PAGE (אלקטרופורזה של ג'ל סודיום דודקיל סולפאט פולי-אקרילאמיד) ו-Native PAGE (אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד לא דנטורציה) הן טכניקות אלקטרופורזה נפוצות של חלבון.מאגר BIS-TRISמשמש לעתים קרובות להכנת חיץ אלקטרופורזה כדי לשמור על יציבות ה-pH של התמיסה במהלך האלקטרופורזה. ב-SDS-PAGE, חלבונים עוברים דנטורציה וטעונים שלילי במאגר מדגם המכיל SDS ומרקפטואתנול, ולאחר מכן מופרדים לפי גודל מולקולרי בג'ל פוליאקרילאמיד.

זה יכול להבטיח את יציבות ערך ה-pH של חיץ האלקטרופורזה, לאפשר לחלבונים לנדוד בצורה הצפויה בשדה חשמלי, ובכך להפריד בצורה מדויקת חלבונים במשקלים מולקולריים שונים ולזהות את המשקל המולקולרי היחסי שלהם.

ב-Native PAGE, חלבונים שומרים על המבנה הטבעי שלהם להפרדה אלקטרופורטית. השימוש בו יכול למנוע דנטורציה של חלבונים עקב שינויים ב-pH, לשמר את הפעילות הטבעית והמידע הקונפורמטיבי של חלבונים, ולסייע בחקר המצב הטבעי והאינטראקציות של חלבונים.

Western blotting היא טכניקה ניסיונית חשובה המשמשת לזיהוי רמת הביטוי של חלבוני המטרה. חיץ פרופאן Bis Tris משמש לעתים קרובות כחיץ הובלה של חלבון בניסויים אימונובלוטינג.

במהלך העברת החלבון מג'ל לממברנה, חיץ פרופן של Bis Tris יכול לשמור על סביבת pH יציבה, מה שמבטיח שהחלבון מועבר לממברנה עם מבנה ומצב מטען נכונים. זה חיוני לקשירת נוגדנים וזיהוי האותות הבאים.

אם חלבונים עוברים דנטורציה או שינויים קונפורמטיביים במהלך תהליך ההעברה, זה עלול לגרום לנוגדנים שלא יוכלו לזהות במדויק את חלבון המטרה, ובכך להשפיע על הדיוק של תוצאות הניסוי. לכן, חיץ פרופאן Bis Tris ממלא תפקיד מכריע בניסויים אימונובליטינג, ועוזר לשפר את הרגישות והאמינות של הניסויים.

תרבית תאים היא טכנולוגיה חשובה במחקר ביו-רפואי, ולערך ה-pH של מדיום תרבית תאים יש השפעה משמעותית על צמיחת התאים ומטבוליזם. ניתן להשתמש במאגר BIS-TRIS פרופן להכנת מדיית תרבית תאים כדי לשמור על ערך pH יציב במהלך תהליך תרבית התאים.

לסוגים שונים של תאים יש דרישות pH משתנות, אך בדרך כלל דורשים צמיחה בסביבה הקרובה ל-pH פיזיולוגי (בערך 7.2-7.4).

חיץ BIS-TRIS פרופאן יכול לחסן את שינויי ה-pH של מצע התרבית במהלך תרבית תאים, למנוע תנודות ב-pH הנגרמות מהצטברות מוצר מטבולי, חילופי גזים וגורמים אחרים, ולספק סביבת צמיחה יציבה לתאים. יש לכך משמעות רבה לגדילה, התפשטות וביטוי תפקודי תקינים של תאים, ועוזרת לשפר את שיעור ההצלחה של תרבית תאים ואת מהימנות תוצאות הניסוי.

אלקטרופורזה של חומצות גרעין היא שיטה נפוצה לזיהוי האורך והריכוז של חומצות גרעין מטרה, כולל אלקטרופורזה של DNA ו-RNA. מתאים לניסויי אלקטרופורזה של חומצות גרעין, זה יכול לשמור על יציבות ה-pH של חיץ האלקטרופורזה.

באלקטרופורזה של חומצות גרעין, מולקולות חומצת גרעין נודדות תחת פעולת שדה חשמלי בהתבסס על גודלן ותכונות המטען שלהן.

זה יכול להבטיח את יציבות ערך ה-pH של התמיסה במהלך האלקטרופורזה, לאפשר למולקולות חומצת גרעין לנדוד בצורה הצפויה, ובכך להפריד במדויק שברי חומצת גרעין באורכים שונים ולזהות את הריכוזים שלהם. יש לכך משמעות רבה עבור מחקרים כגון שיבוט גנים, ניתוח ביטוי גנים ורצף חומצות גרעין.

BIS-ניתן להשתמש ב-TRIS גם כדי לזהות קריאטין קינאז. קריאטין קינאז הוא אנזים חשוב הממלא תפקיד מכריע במטבוליזם של אנרגיית השריר. לקביעת פעילותו יש משמעות רבה לאבחון מחלות שרירים ולהערכת פציעות ספורט. בניסוי הזיהוי של קריאטין קינאז, ניתן לשמור על יציבות ה-pH של מערכת התגובה כדי להבטיח שהאנזים יפגין פעילות קטליטית בתנאי pH אופטימליים. על ידי שליטה מדויקת בערך ה-pH, ניתן לשפר את הדיוק והאמינות של מדידת פעילות קריאטין קינאז, מה שמספק תמיכה חזקה לאבחון קליני ולמחקר.

BIS-TRIS ממלא גם תפקיד חשוב במחקר וביישום של המוגלובין. במהלך תהליך ההפרדה של המוגלובין, ניתן לשמור על יציבותו ופעילותו כדי למנוע דנטורציה או צבירה עקב שינויי pH. יש לכך משמעות רבה לטיהור ולמחקר המבני של המוגלובין.

BIS-TRIS יכול להגן ביעילות על המוגלובין במהלך תהליך הייבוש בהקפאה-. ייבוש בהקפאה היא שיטה נפוצה לשימור מוצרים ביולוגיים, אך חלבונים עלולים להינזק במהלך ההקפאה והייבוש. זה יכול לספק סביבה יציבה להמוגלובין במהלך תהליך -ההקפאה, להפחית דנטורציה ואי-אקטיבציה של חלבון ולשפר את הפעילות והיציבות של ההמוגלובין לאחר ההקפאה-ייבוש.

IEF (איזואלקטרי מיקוד אלקטרופורזה) ו-2-D ג'ל אלקטרופורזה הן טכניקות נפוצות במחקר פרוטאומיקה, המשמשות להפרדה וניתוח של תערובות חלבון מורכבות. BIS-TRIS יכול לשמש כאלקטרוליט קתודי עבור אלקטרופורזה של ג'ל IEF/2-D.

במהלך תהליך IEF, חלבונים נודדים ומתמקדים בשיפוע pH המבוסס על הנקודה האיזואלקטרית שלהם. קתוליט BIS-TRIS יכול לשמור על יציבות ה-pH של חיץ האלקטרופורזה, ומבטיח שחלבונים יכולים לנדוד במדויק לנקודה האיזואלקטרית שלהם במהלך תהליך המיקוד האיזואלקטרי. באלקטרופורזה ג'ל דו-ממדית, השימוש במאגר BIS-TRISעוזר גם לשפר את אפקט ההפרדה והרזולוציה של חלבונים, ומספק נתונים באיכות גבוהה- למחקר פרוטאומי.